Для звичайних чашок Петрі зі скляним дном на ринку зазвичай робиться отвір на дні пластикової чашки Петрі, а потім на дно чашки Петрі приклеюється покривне скло або предметне скло товщиною 170-220 мкм. чашку Петрі з безтіньовим клеєм або силікагелем. Не все дно чашки Петрі зроблено зі скла. Зона, придатна для спостереження, знаходиться тільки в області перфорації. Однак через гідрофобність скла під час культивування клітин клітини не можуть добре прилипати до скла, і стан росту є поганим, і навіть явище розшарування клітин відбувається під час візуалізації конфокального сканування.
Для того, щоб клітини добре прилипали, необхідно підтвердити, що специфічні білкові реагенти були покриті перед використанням посуду зі скляним дном для культивування клітин.
ковдру своїми руками
Для різних клітинних культур потрібні різні реагенти для покриття. У той же час, оскільки білок, який використовується для покриття, є біологічним продуктом, чистота продукту та дозування білка покриття різних компаній відрізняються. Ця технічна публікація лише для довідки. Конкретне дозування реагентів для нанесення покриття має відповідати інструкціям використовуваних марок. . І найкраще провести градієнтний експеримент із реагентами, які ви використовуєте, щоб знайти найбільш прийнятну концентрацію покриття.
Ось приклад полі-L-лізину (PLL, сигма, P4832, 100 мкг/мл):
Покриття PLL підходить для переважної більшості клітин, особливо для культури нейронів у центральній системі. Необхідно забезпечити вміст білка (мкг/см2) на одиницю площі, щоб досягти бажаної кількості під час використання. Рекомендована кількість покриття для PLL у цьому прикладі становить 2 мкг/см2. Необхідно розрахувати необхідну кількість протеїну відповідно до площі покриття та об’єму покриття.
Наприклад: чашка Петрі зі скляним дном 35 мм, площа росту клітин становить 3,5 см2, площа покриття — 4,1 см2, а об’єм розчину для покриття — 400 мкл, тоді рекомендована доза становить 2 мкг/см2. Тоді в одній лунці потрібно 8,2 мкг PLL. Якщо додати лише 400 мкл розчину PLL, концентрація розчину PLL становитиме 20,5 мкг/мл (приблизно 20 мкг/мл). Тому основний розчин потрібно розбавляти надчистою водою.
Конкретні кроки:
1. Розведіть вихідний розчин PLL 1:5 надчистою водою.
2. Додайте 400 мкл розчину PLL до кожної чашки Петрі зі скляним дном 35 мм.
3. Інкубуйте протягом 1-2 годин при кімнатній температурі та аспіруйте розведення PLL.
4. Обережно промийте 3 рази 2 мл розчину PBS або середовища, що не містить сироватки, і аспіруйте розчин для промивання.
5. Безпосередньо додайте клітинну суспензію для культивування.
Метод оцінювання
Через різні властивості різних покривних білків різні покривні білки використовуються по-різному. Нові забруднення часто утворюються через необхідність покрити скляне дно посуду. Крім того, забруднення часто виявляється після того, як клітини були підняті, що не тільки затримує час, але й витрачає витратні матеріали набору. Зрештою, протеїнові реагенти з покриттям і посуд зі скляним дном із гарантованою якістю коштують дорого (посуд із скляним дном поганої якості може протікати через те, що клей не липкий або використаний клей токсичний для клітин).
Конфокальні чашки Петрі без покриття
Для дітей, які бажають заощадити час і сили, зручніше використовувати конфокальний культуральний посуд без покриття.
Фактори, які слід враховувати при виборі відповідної культуральної чашки: чи підходить вона для адгезії ваших власних клітин, чи відповідають оптичні характеристики культуральної чашки конфокальним вимогам.
Чашки Петрі, які відповідають вимогам вищезазначених факторів, не обмежуються чашками зі скляним дном із покриттям. Насправді всі знають, що пластиковий посуд дешевший і легше приклеюється до клітин, ніж скло. Ось приклад чаші для конфокальних культур із Shanghai Jingan, щоб поговорити про параметри, які повинна мати чаша для культур, придатна для конфокальних експериментів:
Можна побачити, що фізичні параметри чашок для конфокальних культур, які відповідають вимогам прямого використання, дуже близькі до скляних, але в той же час вони також мають гідрофільні властивості, які можуть зробити більшість клітин краще прилипають; і пластичність краще, ніж скло. Це дозволяє більшості клітинних ліній і первинних клітин безпосередньо прилипати до стінки та не є крихким, що є хорошим вибором.
Ви також можете знайти найбільш підходящу чашку для конфокальної культури для свого експерименту відповідно до ваших конкретних експериментальних вимог і параметрів у таблиці вище.
Метод оцінювання
Вибір цього типу чашки Петрі не вимагає додаткового покриття, що значно знижує ризик забруднення. А оскільки з пластиковим дном легше працювати, не потрібен клей, щоб прикріпити його до дна чашки Петрі. Виключіть можливість витоку або цитотоксичності.