Планшети для культивування клітин є широко використовуваними та важливими витратними матеріалами в експериментах з культивуванням клітин, оскільки вони можуть заощадити час і матеріали для реагентів для експериментів із клітинами, а також можуть налаштувати кілька динамічних змінних одночасно для полегшення спостереження та виявлення.
плита культури
1. Кришки 96, 24-лункових культуральних пластин або чашок Петрі дуже слабкі, що зручно для вентиляції, але чи можуть бактерії, цвіль та інші забруднювачі також прослизати?
Відповідь: (1) Кришка дуже пухка і відноситься до напіввідкритої культури. Метою цього є дихання (насправді, щоб забезпечити повний обмін СО2 поза межами культуральної чашки з культуральною чашкою для підтримки значення pH середовища).
(2) Існують переваги та недоліки, що збільшує ймовірність забруднення. Крім того, це призводить до випаровування рідини в чашці Петрі, що примітно для точного дозування ліків. Отже, необхідні наступні два заходи:
а) Повітря в інкубаторі має бути чистим (регулярне ультрафіолетове освітлення, спиртовий скраб, інкубатор слід якомога рідше вмикати та вимикати)
b) Вологість в інкубаторі повинна підтримуватися на рівні 100 відсотків (раковина, в яку поміщається стерильна дистильована вода в інкубаторі). Зверніть увагу на асептику!
2. Мої клітини інокулюють на культуральний планшет, і клітини завжди збираються в периферійній частині. Що я повинен зробити? Бачу, що в середині зібрані осередки якихось бойових побратимів. Це проблема з якістю плити?
A: Як ви змішуєте свої клітини? Це піпетка дує чи струшує чашку з культурою? Якщо це останнє, і його струшують по колу, дуже ймовірно, що клітини будуть відкинуті в навколишню частину через відцентрову силу, що призведе до середини клітин. Менше, більше чотирьох тижнів! Ви можете спробувати самі!
Хороший спосіб: перед тим, як культивувати посівну пластину, помістіть її в інкубатор на кілька годин для насичення, а потім вийміть її. При посіві клітин сила повинна бути невеликою. Ви можете використовувати крапельницю збоку отвору культурального планшета. Повільно додайте, щоб дозволити клітинній суспензії текти в лунки планшета, і культивовані клітини ростуть практично рівномірно. Пам’ятайте, що ніколи не струшуйте осцилятор, інакше ваші клітини злипнуться, як ви сказали.
3. Мої клітини нормально пасують, але коли один тип потрапляє в шестилунковий планшет (незалежно від додавання препарату та контролю), завжди є дві або три лунки (випадкові) клітини, які погано ростуть, маленькі та здаються бути зламаним. Хтось з таким стикався? В чому причина?
A: Це може бути пов’язано з температурою рідини, яку ви додаєте. Якщо ваші клітини щойно вийняли, щоб змінити середовище та додати середовище, а середовище також незабаром дістали з 4-градусного холодильника, клітини легко замерзнуть до смерті. Рекомендується спочатку інкубувати середовище в інкубаторі протягом 15 хвилин.
Крім того, це також пов’язано зі станом росту ваших клітин. Клітини перед дозуванням можна інкубувати з високими концентраціями в сироватці крові. Переконайтеся, що клітини знаходяться в хорошому стані.
Або його можна інкубувати на 37-градусній водяній бані, або проблема самої культуральної пластини, ви можете спробувати іншу культуральну пластину. Іншою можливістю є проблема стану клітин, регулюйте концентрацію сироватки під час засівання планшета.
4. Останніми днями я використовував шестилунковий культуральний планшет для інокуляції клітин. Після 24-годинного культивування я змінив середовище. Перед зміною середовища я спостерігав, що клітини прилипли до стінки, і стан був дуже добрим. Після зміни середовища я негайно використав мікроскоп. Було помічено, що майже половина клітин у кожній лунці показала стан, близький до смерті. Клітини стають дуже маленькими та виробляють багато сміття, тоді як інша половина клітин нормальна, існує вододіл між аномальними клітинами та нормальними клітинами, верхнє півколо добре, нижнє півколо погано, як це? Що сталося?
A: Ви можете побачити, чи є якась із наведених нижче причин
a. Пластина з культурою не розміщується горизонтально;
b. Як щодо вашого культурального середовища, якщо культуральне середовище закінчиться, клітини не будуть прилипати. Спробуйте свіжоприготоване середовище
в. Можливо, проблема плити. Змінити тарілку на іншу марку або скористатися пляшкою з культурою не проблема.
d. Чи звернули ви увагу на вплив вентилятора під час зміни середовища, особливо коли є багато культуральних пластин, які потрібно замінити, це легко спричинити зменшення та розрив клітин через вітер і втрату води. Якщо так, то середовище слід міняти одну за одною, і не бійтеся витратити піпетку, зверніть увагу на ефективність операції!
5. Минуло чотири дні відтоді, як клітини перетравлювали та інокулювали в 24-лунковий планшет, і середня частина кожної лунки завжди була заповнена. Середовище промивали PBS щодня, і така ж ситуація виникала, коли середовище змінювали наступного дня. Краї досить довгі, а центр повний мертвих клітин?
Відповідь: Якщо клітини навколо щільні, а посередині рідкісні, це приблизно з таких причин:
Середовища додано занадто мало. В основному через проблему натягу рідини.
Чи менше води на дні інкубатора;
Струсіння після посіву клітин було занадто сильним. Клітини розподіляються навколо завдяки відцентровій силі.
Ключ до того, чи клітини розподілені рівномірно, полягає в тому, що кожен тип клітин має індивідуальні відмінності, і операції інших людей можуть не підходити для вас. Тож вам доведеться самостійно дослідити та знайти набір правил, які є унікальними для ваших клітин. Ви маєте такий досвід:
(1) Усі клітинні суспензії для посіву необхідно змішати піпеткою перед посівом.
(2) Відповідно до записів об’єм рідини 24-планшета з лунками становить 1 мл, фактично об’єму 1 мл достатньо.
(3) Під час інокуляції додайте зразок повільно, не забувайте злегка повертати кінчик піпетки. Зразок не можна додавати занадто швидко, щоб уникнути накопичення клітин в одній точці додавання зразка, і зверніть увагу на додавання зразків у різних частинах, тобто під час додавання рухомого пістолета. Голова, штучно змушує клітини прагнути розподілятися рівномірно. Це забезпечує рівномірний розподіл клітин.