ПЛР виявлення
У полімеразній ланцюговій реакції (ПЛР) в якості матриці використовується шматочок ДНК, а за участю ДНК-полімерази та нуклеотидного субстрату ДНК ампліфікується до достатньої кількості для структурно-функціонального аналізу. Метод ПЛР-виявлення має надзвичайно важливе значення в клінічній експрес-діагностиці бактеріальних інфекційних захворювань.
Принцип ПЛР використовується для ампліфікації фрагмента ДНК, розташованого між двома відомими послідовностями, подібно до процесу реплікації природної ДНК. Молекула ДНК, що підлягає ампліфікації, використовується як матриця, а пара олігонуклеотидних фрагментів, комплементарних 5'кінцю і 3'кінцю матриці, використовуються як праймери. Під дією ДНК-полімерази вона йде за матрицею за напіврезервованим механізмом реплікації. Подовження ланцюга до завершення синтезу нової ДНК, повторіть цей процес, цільовий фрагмент ДНК може бути ампліфікований.
(ПЛР) – це метод ферментативного синтезу специфічних фрагментів ДНК in vitro. Він складається з кількох етапів високотемпературної денатурації, низькотемпературного відпалу та відповідного температурного розширення. Такі функції, як висока чутливість, простота експлуатації та економія часу. Його можна використовувати не тільки в фундаментальних дослідженнях, таких як виділення генів, клонування та аналіз послідовності нуклеїнових кислот, а й у діагностиці захворювань або будь-якого місця, де є ДНК і РНК. Полімеразна ланцюгова реакція (скорочено полімеразна ланцюгова реакція, ПЛР) також відома як безклітинне молекулярне клонування або специфічна послідовність ДНК in vitro, спрямована на праймерну технологію ферментативної ампліфікації.
Напівзарезервована реплікація ДНК є важливим шляхом для біологічної еволюції та проходження. Дволанцюгова ДНК може бути денатурована і розплавлена в один ланцюг під дією різноманітних ферментів. За участю ДНК-полімерази та промотору дволанцюгова ДНК може реплікуватися в ті самі дві молекули за принципом комплементарного спарювання основ. В ході експериментів було виявлено, що ДНК також може бути денатурована і розплавлена при високих температурах, а при зниженні температури її можна ренатурувати в подвійні нитки. Таким чином, контролюючи денатурацію та ренатурацію ДНК через зміни температури та розробляючи праймери як промотори, додавання ДНК-полімерази та dNTP може завершити реплікацію специфічних генів in vitro.
Найпростішим є використання спеціального обладнання, використання dNTPS, Mg2+, специфічних праймерів, ДНК-полімерази та буферної системи, додавання шаблону, який є зразком ДНК для ампліфікації in vitro, та проведення електрофорезу. Якщо його можна ампліфікувати, а розмір ампліфікованого продукту відповідає цільовій смузі, це означає, що праймер і шаблон є специфічними, а індекс виявлення позитивний.
Методи та етапи виявлення нуклеїнових кислот ПЛР
Тестування нуклеїнової кислоти вимагає п’яти етапів: відбір проб, утримання зразка, утримання, екстракція нуклеїнової кислоти та комп’ютерне тестування.
Виявлення нуклеїнових кислот
Першим кроком є збір людських виділень і протирання носової або глоткової пробою носової або глоткової порожнини та двосторонніх глоткових мигдалин.
На другому етапі медичні працівники зберігали зразок, занурювали голову тестового зразка в розчин для консервації клітин і закручували кришку пробірки відразу після того, як відламали хвостик.
У третій частині помістіть зразок в герметичний пакет, зберігайте і вчасно відправте на перевірку.
Четвертий крок – відправка зразка в лабораторію для вилучення нуклеїнової кислоти.
На п’ятому етапі екстракт піддають реакції флуоресцентної ПЛР-ампліфікації.
Також знадобляться деякі витратні матеріали та інструменти
Інструмент для ПЛР, пробірка для ПЛР, наконечник піпетки, пластина з глибокими лунками, резервуар і реагенти додані
