Як кажуть, якщо робітник хоче добре працювати, він повинен спочатку відточити інструменти. Вибір витратних матеріалів дуже важливий для отримання задовільних результатів експерименту ПЛР. При аналізі результатів ПЛР ми часто зосереджуємося на аналізі праймерів, концентрації ферменту, температури та часу, але ігноруємо, що витратні матеріали для ПЛР також є одним із факторів впливу. Існує багато видів витратних матеріалів для ПЛР, як правильно вибрати витратні матеріали для ПЛР? Ось кілька запитань, які допоможуть вам знайти відповідь.
витратні матеріали для pcr
1. Чому витратні матеріали для ПЛР зазвичай виготовляються з ПП?
Незалежно від того, чи це звичайна ПЛР, чи флуоресцентна кількісна ПЛР у режимі реального часу (qPCR), зазвичай її витратні матеріали будуть у прямому контакті з реагентами чи зразками, тому в процесі виробництва та підготовки потрібні високоякісні матеріали та хороші методи обробки. Загальні витратні матеріали виготовлені з поліпропілену (ПП). Поліпропілен (PP) є біологічно інертним матеріалом, поверхню якого важко приклеїти до біомолекул, він має хорошу хімічну стійкість і температурну стійкість.
2. Як вибрати пробірки/планшети для ПЛР різного об’єму?
Загальні об’єми для пробірок/планшетів для ПЛР:
• Одна пробірка/{{0}}пробірка/12-пробірка: 0,5 мл, 0,2 мл, 0,1 мл
• {{0}}лунковий планшет: 0.2 мл, 0,1 мл
• {{0}}лунковий планшет: 0,02 мл
Технічні характеристики пробірок/планшетів для ПЛР:
Виберіть відповідний продукт відповідно до конкретних експериментальних вимог. Об’єм більшості ПЛР-пробірок відповідає вимогам ПЛР-реакцій. Специфікації ємності доступні для стандартної та низької ємності. Як правило, спочатку рекомендується вибирати трубки малої місткості. Оскільки малооб’ємні реакторні труби/пластини мають менший запас, теплопередача покращується, а випаровування зменшується. У той же час, необхідно уникати додавання занадто великої або занадто малої проби під час додавання зразків. Занадто багато може призвести до зниження теплопровідності, розливу та перехресного забруднення, а занадто мало може призвести до втрати зразка через випаровування.
3. Яка різниця між плоскою кришкою та опуклою кришкою однотрубної або 8-рядної трубки?
Якщо об’єм зразка невеликий, перевагу надають однопробірним або {{0}}пробірним пробіркам. Однак, коли необхідний об’єм реакції є великим, переважають окремі пробірки, а об’єм може досягати 0,5 мл. Існує два типи однотрубних і 8-трубчастих трубок з плоскою кришкою та опуклою кришкою, кожна з яких має свої переваги. Плоский ковпачок забезпечує точну доставку флуоресцентного сигналу для КПЦР; легко писати на маркерах. Опукла кришка контактує з кришкою приладу ПЛР, щоб зменшити деформацію трубки, спричинену тиском; однак це вплине на передачу флуоресцентних сигналів і не може бути застосоване до експериментів qPCR.
4. Які відмінності у сценаріях використання різних 96-лункових планшетів?
96-Тарелки з лунками зазвичай поділяються на пластини без борту, пластини з напівбортом і планшети з повним бортом.
Пластини без бордюрів: сумісні з більшістю термоциклерів або апаратів qPCR, але не підходять для автоматизованих застосувань. Стабільність не висока під час процесу піпетування, тому його потрібно використовувати з тримачем для пластин.
Пластина з напівспідницею: її можна адаптувати для маркування або нанесення штрих-коду та автоматичного нанесення, а також має хорошу стабільність при піпетуванні.
Пластина з повною спідницею: дуже підходить для автоматизованих лабораторних застосувань, але також підходить для етикеток і штрих-кодів. Хороша механічна міцність, підходить для ПЛР-машин з виступаючими модулями та висока стабільність під час піпетування.
5. Чи є матеріал ПЛР-планшета/пробірки товщим і стабільнішим?
немає. Витратні матеріали для ПЛР повинні мати однакову товщину стінок, щоб забезпечити стабільний теплообмін. Стінка надтонкої трубки на 50 відсотків тонша, ніж стандартна версія, що може ще більше зменшити тепловий бар’єр, що забезпечує швидшу та кращу реакцію.
6. Чому для пластин із 96-лунками або 384-лунками обрізані кути та мітки відрізняються?
Вирізання кута: Вибір положення кутового різання пластини ПЛР залежить від вимог адаптованого інструменту для легкого позиціонування.
Ідентифікація: буквено-цифрове маркування на планшетах для ПЛР допомагає ідентифікувати окремі лунки та місця розташування зразків. Як правило, це рельєфний кольоровий цифровий логотип або вигравіруваний логотип. Для деяких автоматизованих експериментів застосування реакційна пластина з відбитими мітками буде краще запечатана.
7. Деякі лунки планшета для ПЛР виступають, а інші плоскі. Який з них кращий?
Що підходить, то добре. Звичайні планшети для ПЛР мають два типи: плоскі краї лунок і рельєфні краї лунок. Реакційна пластина з плоским краєм лунки, підходить для більшості термоциклерів. Реакційна пластина на краю отвору стояка зручна для запечатування, що може зменшити ризик перехресного забруднення між зразками.
8. Як вибрати ПЛР пробірки/планшети різних кольорів?
Для звичайних ПЛР-реакцій можна використовувати прозорі. У реакції ПЛР у реальному часі чутливість і консистенція білої пробірки відносно вищі. Білі стінки трубки запобігають проходженню флуоресценції через стінки трубки та заломленню, тим самим запобігаючи проходженню флуоресценції до нагрівального модуля, поглинанню модулем або нерівномірному відображенню. Порівняно з прозорими трубками, сильніші та більш сфокусовані сигнали флуоресценції можуть бути зібрані у верхній частині білих трубок.