Способи уникнути забруднення клітин: поради щодо піпетування, які вам потрібно знати

Серед багатьох змінних, які контролюються в культурі клітин, одна конкретна змінна впливає на весь експеримент: забруднення. Один із факторів, що сприяє забрудненню клітин, не завжди враховується, і хоча він може непомітно вплинути на стан клітин і дані вимірювань, це забруднення через піпетку.

Вибору піпеток, наконечників піпеток і програм дозування приділяється мало уваги при плануванні експериментів. Навіть загальний розчин (автоклавування), щоб уникнути забруднення піпетуванням, може бути не таким ефективним, як прийнято вважати.

Перше правило культивування клітин: уникайте контамінації. Чому стерильність так важлива для успішного культивування клітин?

Асептична техніка є єдиним способом отримати надійні та відтворювані результати. Забруднення може вплинути на ріст клітин, метаболізм і здоров’я -- те, що вчені зацікавлені вивчати. Забруднені клітинні лінії не мають бажаних властивостей і щоразу функціонують по-різному залежно від тяжкості забруднення. Крім того, якщо забруднювачі переростуть ваші клітини, які вас цікавлять, ви можете закінчити вивчення не того організму.

З якими видами забруднювачів найчастіше стикаються вчені?

Основними джерелами забруднення є бактерії, дріжджі та цвіль. У культурі клітин найважче виявити та знищити мікоплазму. Менш поширені типи забруднень включають, наприклад, пластикові вимивачі в лабораторних витратних матеріалах.

Які поширені причини забруднення клітин?

Поширеним джерелом забруднення є погане дозування, наприклад використання забруднених піпеток і наконечників без фільтра. Крім того, проблемою є відсутність належної лабораторної практики, як-от неадекватна дезактивація таких інструментів, як інкубатори або камери з ламінарним потоком. Для видалення мікоплазми необхідна фільтрація з використанням фільтра 0.1 мкм замість фільтра 0.2 мкм.

Три забруднення піпетуванням:

1. Забруднення від піпетки до зразка: піпетка або наконечник піпетки забруднюють зразок.

Як уникнути:

Використовуйте стерильні наконечники фільтрів, щоб запобігти забрудненню корпусу піпетки.

Міняйте наконечник піпетки після кожного зразка.

Регулярно автоклавуйте або стерилізуйте піпетки етанолом. Виберіть піпетку, сумісну з автоклавом.

2. Забруднення зразка в піпетку: введення зразка в корпус піпетки забруднює піпетку.

Як уникнути:

Використовуйте наконечники фільтрів або наконечники позитивного зміщення, щоб запобігти потраплянню зразків у корпус піпетки.

Під час піпетування тримайте піпетку у вертикальному положенні. Зберігайте піпетку вертикально.

Під час піпетування нахиліть пляшку.

Повільно відпустіть кнопку, щоб зразок не потрапив у піпетку. Виберіть піпетку з функцією м’якого викиду.

3. Забруднення між зразками: залишкові зразки піпетування переносяться до наступного зразка. Зазвичай виникає, коли один і той же наконечник використовується кілька разів.

Як уникнути:

Міняйте наконечник піпетки після кожного зразка.

Використовуйте наконечники фільтра або наконечники позитивного зміщення, щоб запобігти потраплянню зразка в корпус піпетки та на наступний зразок.

Переконайтеся, що наконечник піпетки герметично прилягає до піпетки, щоб уникнути витоку зразка. Наприклад, наконечник Yongyue Medical.

Чи існують фактори забруднення, про які вчені можуть навіть не знати?

Ефективність автоклавування часто не перевіряється, і якщо автоклав не працює належним чином, наконечники автоклавованих піпеток можуть бути нестерильними. Попередньо простерилізовані фільтри, загорнуті в захисну упаковку, є найбезпечнішим засобом запобігання подібним нещасним випадкам. Процес попередньої стерилізації для високоякісних наконечників піпеток регулярно перевіряється для забезпечення ефективності попередньої стерилізації.

Як інструменти для піпетування та дозування полегшують вченим обробку зразків у стерильному середовищі?

Вибір правильних піпеток і наконечників піпеток може полегшити асептичний робочий процес. Медичні піпетки Yongyue легко чистити та відкривати без інструментів, що прискорює щоденне очищення. Оскільки автоклавування ефективніше видаляє забруднення, ніж етанолові серветки, механічні піпетки Sartorius повністю автоклавуються, що означає, що ви можете надійно знезаразити свої піпетки. Виштовхування м’якого наконечника запобігає потенційному ризику забруднення від бризок під час викидання наконечника. Попередньо простерилізовані наконечники фільтрів захищають ваші зразки від перехресного забруднення. Медичні наконечники Yongyue також упаковані в герметичну упаковку, що означає, що будь-яке забруднення в умовах зберігання та доставки не контактуватиме з наконечниками або коробкою для наконечників.

Як вчені можуть уникнути забруднення? Які ваші головні поради щодо стерильної роботи?

По-перше, належна лабораторна практика та ретельне планування робочих кроків. Переконайтеся, що в камері з ламінарним потоком зберігається лише те, що необхідно для певного робочого процесу, і використовуйте одну клітинну культуру одночасно. Крім того, регулярне тестування на забруднення, такі як мікоплазма, дає вам спокій і впевненість у своїх результатах. При роботі в стерильних умовах гроші, витрачені на попередньо простерилізовані наконечники фільтрів і стерильні реагенти, варті грошей.