Як ми всі знаємо, типи клітин, які культивуються в лабораторії, можна грубо розділити на два типи: прикріплені клітини та клітини-суспензії, і лише кілька типів клітин існують в обох станах.
Суспензійні клітини відносяться до типу клітин, які можуть рости в зваженому стані в середовищі, не покладаючись на опори, такі як лімфоцити та більшість клітин системи крові. (такі як клітини лейкемії миші WEHI-3, клітини лейкемії людини K-562, HL-60). У промисловості все більше прикріплених клітин одомашнюють і культивують у повній суспензії. В даний час клітини SP2/0, NS0, CHO, BHK і HEK293 в основному використовуються в промисловості, і вони в основному використовуються для виробництва рекомбінантного білка; пасажні клітини, які зазвичай використовуються у ветеринарних біологічних продуктах, в основному включають клітини BHK21, культивовані в повній суспензії, клітини MDCK; і клітини Vero, клітини PK, клітини ST, клітини Marc145 тощо за допомогою суспензійної культури мікроносія, кожна клітина має різні характеристики.
Суспензійні клітини
Суспензійні комірки "thp-1" 200x
Загалом суспензійні клітини легше обробляти, ніж адгезивні клітини, оскільки для проходження суспензійних клітин не потрібна трипсинізація. Але це не означає, що суспензійні клітини легше вирощувати, ніж прикріплені клітини. Для новачків це більш складно. Завжди виникають різні проблеми: наприклад, чому завжди з'являються мертві клітини і диференціація клітин; погоджуються, що проходження легке, але результатом буде диференціація; проблеми знову виникають після кріоконсервації та відновлення!
Далі обговоримо деякі ключові моменти щодо культивування суспензійних клітин~
Пункт 1: Вистачить терпіння, воно дуже потрібне
Багато суспензійних клітин мають відносно низьку життєздатність, коли їх щойно відновили після кріоконсервації. У цей час нам потрібно бути достатньо терплячими, щоб дочекатися, поки клітини завершать своє самовідновлення та перейдуть у фазу логарифмічного росту. Наприклад, THP-1 (моноцитарний лейкоз людини) часто потребує 7-10 днів періоду відновлення від розморожування до нормальної проліферації; Jurkat, Clone E6-1 (клітини Т-лімфоцитарної лейкемії людини) також потребують 5-7 днів після одужання. Повернути в стан до заморожування. Новачки можуть відмовитися від навчання в цей період, тому запасіться терпінням! Культивування таких клітин – це теж процес виховання терпіння!
Пункт 2: Візьміть щільність щеплення
Загалом, щільність клітин суспензії не повинна бути нижчою за 500 000/мл. Багато суспензійних комірок залежать від щільності, і нерозповсюдження, викликане низькою щільністю, також є однією з поширених проблем для новачків. Звичайно, існує дуже мало клітин, стан яких погіршується при високій щільності, наприклад W6/32 (клітини В-клітинної гібридоми миші). Тому дуже важливо шукати відповідну інформацію, щоб зрозуміти характеристики клітин, перш ніж культивувати невідомі клітини. Тільки знаючи себе і ворога, можна виграти всі битви!
Частота заміни середовища не повинна обмежуватися "чітко". Клітини - це живі істоти. Під час безперервного циклу культивування певні поживні речовини, такі як додаткове середовище та глюкоза, можна додавати кілька разів залежно від стану росту клітин, щоб підтримувати хороший стан росту клітин. . У процесі суспензійного культивування з проліферацією клітин, споживанням поживних речовин у вихідному середовищі та збільшенням метаболітів життєздатність клітин зменшиться, а своєчасне додавання поживних речовин зробить клітини у відносно хорошому середовищі для життя. Я не буду вдаватися в подробиці, уникайте частого центрифугування та заміни рідини.
Поговоримо про метод заміни рідини:
①Метод відцентрового повного обміну рідини
Тобто видаліть усе старе середовище центрифугуванням (800-1000об/хв, 5 хв) і замініть свіжим середовищем. Цей метод підходить для заміни середовища на «шкірні тверді» добре підняті суспензійні клітини (наприклад, K562) або поточну ситуацію, коли клітини знаходяться в хорошому стані, а щільність висока, що призводить до великого споживання середовища. Перевага цього методу полягає в тому, що середовище ретельно змінюється, і частина клітинного сміття може бути видалена, але це також призведе до певного механічного пошкодження клітин.
②Метод відцентрового напівобміну
Тобто центрифугуванням (800-1000об/хв, 5 хв) 50 відсотків клітинної суспензії замініть 50 відсотків об’єму свіжого середовища. Цей метод підходить для порівняння «лицемірних» клітин, які важко культивувати (таких як thp-1), або ситуації, коли щільність низька, але потрібно видалити більше залишків у стані налаштування.
③Метод обміну седиментаційної рідини
Тобто замість використання центрифуги використовується метод природного відстоювання під дією тяжіння для відділення середовища від клітин, щоб повністю або частково замінити свіже середовище. Однак він має обмеження щодо застосування — він підходить лише для клітин, які можуть утворювати кластери клітин певного розміру (інакше вони не можуть осідати природним шляхом і їх можна центрифугувати лише на низькій швидкості), особливо коли мова йде про клітини, які покладаються на клітинну агрегацію для проліферації. , наприклад NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Цей метод може мінімізувати механічні пошкодження, спричинені процесом центрифугування під час процесу обміну рідини, зберігаючи при цьому агреговану клітинну масу, а видалення клітинних уламків відбувається відносно ретельно.
Після освоєння вищевказаних пунктів, а також хорошого посівного матеріалу клітин, не за горами виростити «красиві» суспензійні клітини!
планшет для культур клітин
U-подібна пластина для культури клітин Yongyue Medical здебільшого використовується для культивування суспензійних клітин із використанням медичного полістиролу (PS), виробленого в 100-рівневому цеху очищення, стерилізованого опроміненням, не містить ДНКази, РНКази та пірогену -безкоштовно , Безпека та захист навколишнього середовища.
Планшети для клітинних культур доступні в різних специфікаціях для задоволення потреб різних бактеріальних культур. Типи продуктів поділяються на 6-колодязь, 12-колодязь, 24-колодязь, 48-колодязь, 96-колодязь і 384-колодязь, з яка 96-лунка поділяється на плоскодонне, U-подібне, V-подібне дно; U-подібні культуральні пластини в основному використовуються для культивування суспензійних клітин; Культуральні чашки V-подібної форми в основному використовуються для імунологічних експериментів з гемаглютинації.
